真菌形态学检查方法

菌落形态观察

1

直接镜检

KOH涂片，生理盐水涂片。

2

染色检查

墨汁涂片、乳酸酚棉兰染色、派克墨水染色、革兰氏染色、抗酸染色、吉姆萨染色、过碘酸－希夫染色（PAS）。

3

组织病理染色

HE，PAS，嗜银染色，瑞氏染色等荧光检查：荧光显微镜下直接荧光剂涂片后观察。

真菌镜检的临床意义

在无菌体液标本中直接镜检发现真菌成分常可确立深部真菌病的诊断；但在有菌部位则一般只有发现大量(最好是多次)真菌菌丝方可作出诊断。

通过直接镜检发现特征性的真菌结构可帮助鉴定菌种或属,一般可区分念珠菌、青霉、曲霉、接合菌、镰刀菌、着色真菌（链隔孢）、隐球菌、马拉色菌、无绿藻等的感染。

提示真菌的致病性、活动性：如念珠菌出现菌丝。

常见致病型酵母菌形态学

白色念珠菌

白色念珠菌在沙保培养基上呈现奶油色，光滑的外表。

隐球菌

隐球菌菌落形态

墨汁染色：镜下

常见致病丝状真菌形态

曲霉

左起：烟曲霉，黄曲霉，黑曲霉

1

烟曲霉

菌落-深绿色/烟绿色丝绒样表面，镜下-分生孢子头为短柱状，顶囊烧瓶状，单层小梗，分布于顶囊上半部分，分生孢子球形。

2

黄曲霉

菌落-黄绿色/棕绿色羊毛状/棉毛状质地，有放射状沟纹，镜下-分生孢子头开始呈放射状，逐渐变为疏松状，顶囊球形或近球形，小梗可单层/双层，布满顶囊表面，放射状排列，分生孢子球形或近球形。

3

黑曲霉

菌落-初为白色到黄色，最后变为黑色，羊毛状/绒毛状质地，镜下-分生孢子头放射状，顶囊球形/近球形，小梗双层，密生于顶囊全部表面，分生孢子球形。

双相真菌

马尔尼菲青霉

菌丝相

菌丝相：25℃，2周后成熟菌落呈玫瑰红色蜡样，有脑回样皱纹及放射状沟纹，产生红色色素渗入基质。镜下可见无色透明、分隔菌丝，分生孢子梗光滑而无顶囊，单链分生孢子，散乱分布。

酵母相：37℃，无色素产生。镜下可见表面光滑、圆形/椭圆形/长形酵母细胞，裂殖而非芽生，也可见短菌丝。

通过上述菌落形态特征描述，染色、镜检可以把常见致病真菌进行分类，对我们认识掌握常见致病真菌具有重要的帮助和指导。